美国红枫组织培养具体方法
美国红枫组织培养的优势：环境条件可控误差小、生长快、周期短、另外离体组织培养还可以连续运转、周年试验生产等优点，下面谈谈美国红枫组织培养具体操作方法
1、美国红枫外植体处理及启动培养
1)外植体取材：当年生茎段或茎尖
2)外植体灭菌方法：用毛笔蘸肥皂水轻轻刷洗枝条。将刷洗后的枝条放入烧杯中，用流水冲洗30min左右，后转入超净工作台，移至无菌瓶中，用70％的酒精表面灭菌30s，无菌水冲洗；1％NaClO溶液灭菌2min，无菌水冲洗，再用1％NaClO溶液灭菌2min，无菌水冲洗至少3次；每次冲洗时间不少于3min。冲洗后切去植物材料与灭菌药液接触的伤口，截取1-2cm左右带节茎段或茎尖用于组织培养。
2、美国红枫的组织培养
1)启动培养
以步骤1得到的带节茎段或茎尖为外植体，将其接种于装有20ml启动培养基的200ml培养瓶中，每瓶启动培养基上接种一个茎段或茎尖，用聚丙烯塑料瓶盖封口，置于组培室中进行启动培养，组培室的条件控制在温度25℃，空气相对湿度为70％，采用日光灯照明，光照强度2800lx，光照时间为14小时/天。
经过实验筛选得到的最优的启动培养基为在MS培养基中加入6-苄基腺嘌呤(6-BA)1.0mg/L，萘乙酸(NAA)0.1mg/L，30g/L绵白糖，6g/L琼脂，调节PH为6.0-6.2，在1.06kg/Cm3压力下(121℃)下灭菌15min，冷却后得到的固体培养基。
结果表明，启动培养3-5天带节茎段腋芽萌动、茎尖开始伸长，20-30天长至2cm左右，出芽率87％(出芽率＝接种外植体总数-污染数-死亡数/接种总数×100％)。
MS培养基成分为：大量元素：硝酸钾1900mg/L、硝酸铵1650mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、硫酸镁370mg/L、氯化钙440mg/L，微量元素：碘化钾0.83mg/L、硼酸6.2mg/L、硫酸锰22.3mg/L、硫酸锌8.6mg/L、钼酸钠0.25mg/L、硫酸铜0.025mg/L、氯化钴0.025mg/L，铁盐乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L、硫酸亚铁27.8mg/L，有机成分：肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L、盐酸硫胺素0.1mg/L、盐酸吡哆醇0.5mg/L、烟酸0.5mg/L。
2)美国红枫增殖培养
当步骤1)得到的外植体的腋芽或顶芽长2cm左右时取下接入装有40ml增殖培养基的200ml培养瓶中，每瓶增殖培养基上接种3-5个腋芽或顶芽，用聚丙烯塑料瓶盖封口，置于与步骤1)所述相同条件的组培室中进行增殖培养。
增殖培养基为在MS基本培养基中添加0.008mg/L塞苯隆(TDZ)，30g/L绵白糖，6g/L琼脂，调节PH值至6.0-6.2，在1.06kg/Cm3压力下(121℃)下灭菌15min，冷却后得到的固体培养基。
增殖培养结果表明，增殖培养7-10天接种的腋芽或顶芽基部开始有愈伤组织出现，继续培养到15-20天在愈伤组织上可见不定芽分化，培养40天不定芽长到3-5cm，分化率为100％(分化率＝分化出不定芽的腋芽及顶芽数/接种的腋芽或顶芽总数×100％)，平均增殖系数为5.8(增值系数＝分化的不定芽总数/接种的腋芽及顶芽总数×100％)。
3)美国红枫生根培养
将步骤2得到的2cm以上的不定芽接入装有40ml生根培养基的200ml培养瓶中，每瓶生根培养基上接种3-5个不定芽，用聚丙烯塑料瓶盖封口，置于与步骤1)所述相同条件的组培室中进行生根培养。生根培养基为1/2MS基本培养基(1/2MS培养基是指MS培养基中大量元素用量减半，其它成分不变的培养基)中添加吲哚丁酸(IBA)0.1mg/L，20g/L绵白糖，5g/L琼脂，调节PH值至6.0-6.2，经在1.06kg/Cm3压力下(121℃)下灭菌15min，冷却后得到的固体培养基。
生根培养4～6天在材料的基部明显可见数个颗粒状的突起，8～10天有白色根发出，培养20天后大部分材料的根可以达到3-4cm，生根率为97％(生根率＝生根的不定芽数/接种的不定芽总数×100％)。
3、美国红枫小苗的炼苗移栽
3月上旬到4月中旬，将步骤2生根培养20天得到的根长至3-4cm生根苗进行炼苗，具体为从组培室中取出放置到日光充足但不直射，温度17℃—25℃，湿度50％—70％的环境中7天内逐步打开组培瓶的封口，第7天将生根苗从培养瓶中取出，20～30℃温水洗去基部残留培养基，用0.3％的KMnO4表面灭菌2min，20～30℃温水冲洗干净，用于移栽。
移栽具体方法如下所述：
用珍珠岩、蛭石、草炭土按照体积比为1：2：2的比例混合，作为培养基质，将上述得到的美国红枫小苗栽种到该培养基质上，浇透水，置于密闭、透光的塑料小棚，棚内温度白天保持在20-30℃，夜间不低于15℃，湿度保持在60-80％，此过程中第4、5天时再浇一次透水，培养第5-7天、移栽苗的新叶开始展新叶，就开始在温度15-25℃，湿度50-70％的环境下，从两边逐步揭开塑料薄膜，3-10天内全部揭开。将美国红枫小苗继续在环境温度15-25℃，湿度50-70％的条件下，培养30天，成活率90％(成活率＝成活苗数/移栽生根苗总数×100％)。每隔3-5天浇透水一次。
